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ELISA與Western Blot實(shí)驗(yàn)的區(qū)別
更新時(shí)間:2025-09-25瀏覽:283次

  ELISA與Western Blot實(shí)驗(yàn)的區(qū)別

  一、基本原理與核心差異

  ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))?

  基于抗原-抗體特異性結(jié)合,通過酶

  標(biāo)記信號(hào)放大(如HRP催化顯色)實(shí)現(xiàn)檢測(cè),通常使用96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板作為固相載體?。

  適用于溶液樣本(如血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清)的定量分析,靈敏度高且可高通量操作?。

  Western Blot(蛋白質(zhì)免疫印跡)?

  需先通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì),再轉(zhuǎn)印至固相膜(如PVDF膜),通過抗體結(jié)合和化學(xué)發(fā)光/顯色檢測(cè)目標(biāo)蛋白?。

  可提供蛋白質(zhì)分子量信息,適用于定性或半定量分析,尤其適合研究翻譯后修飾?。

  二、操作流程對(duì)比

  步驟? ?ELISA? ?Western Blot?

  樣本處理? 直接檢測(cè)液體樣本,無需電泳 需提取蛋白并電泳分離?

  檢測(cè)方式? 酶標(biāo)儀讀取吸光度(OD值) 化學(xué)發(fā)光/顯色成像系統(tǒng)?

  耗時(shí)? 數(shù)小時(shí)(快速) 1-2天(復(fù)雜)?

  三、應(yīng)用場(chǎng)景選擇

  ELISA優(yōu)先?:

  需高精度定量(如細(xì)胞因子濃度測(cè)定)?。

  高通量篩選(如藥物開發(fā)中的抗體檢測(cè))?。

  Western Blot優(yōu)先?:

  需分析蛋白質(zhì)分子量或翻譯后修飾?。

  驗(yàn)證蛋白質(zhì)表達(dá)水平(如基因敲除效果)?。

  四、技術(shù)局限性

  ELISA?:無法區(qū)分蛋白質(zhì)亞型或修飾,依賴抗體特異性?。

  Western Blot?:定量誤差較大,操作復(fù)雜且通量低?。

  五、總結(jié)

  ELISA與Western Blot雖均基于免疫反應(yīng),但ELISA以定量見長,Western Blot以定性分析為優(yōu),選擇時(shí)需結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康?定量/定性)、樣本類型及設(shè)備條件綜合判斷?。

  注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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